小反刍兽疫病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒说明书

兽用

【兽药名称】

通用名称：小反刍兽疫病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒

商品名称：无

英文名称：Blocking ELISA Kit for Detecting Antibody of Peste des Petits Ruminants Virus

汉语拼音：Xiaofanchushouyi Bingdu Jingzheng ELISA Kangti Jiance Shijihe

【主要成分与含量】

【作用与用途】用于检测绵羊、山羊血清或血浆中小反刍兽疫病毒（PPRV）抗体。

【用法与判定】

1、实验准备：试剂盒各个组分在使用前均须恢复至室温（20~25℃），加液前充分摇匀。

2、操作步骤

PPRV B抗原包被板（I）上PPRV阴性血清（III）、PPRV阳性血清（IV）、样品稀释液（II）和样品的分布如图N、P、Cm和S所示

1）在A1和B1孔加入PPRV阴性血清（III）各50μl；

2）在C1和D1孔加入PPRV阳性血清（IV）各50μl；

3）在E1和F1孔加入样品稀释液（II）各50μl；

4）剩余孔加入25μl样品稀释液（II），然后加入25μl样品用于检测；

5）轻轻振匀孔中样品（勿溢出），37℃孵育60分钟；

6）将洗涤液20×（V）用纯水或去离子水做20倍稀释，再按0.5‰比例加入吐温-20（VII），即为工作浓度的洗涤液1×；

7）甩干PPRV B抗原包被板孔中的液体，每孔加入300μl洗涤液1×,洗涤4次，在洗涤和加入下一个试剂前，避免孔壁变干；

8）将酶标抗体5×（VI）用样品稀释液（II）做5倍稀释,即为工作浓度的酶标抗体1×；每孔加入50μl的酶标抗体1×；

9）37℃孵育30分钟；

10）甩干PPRV B抗原包被板孔中的液体，每孔加入300μl洗涤液1×，洗涤4次,在洗涤和加入下一个试剂前,避免孔壁变干；

11）每孔加入50μl底物溶液（VIII）；

12）室温下避光孵育15分钟；

13）每孔加入50μl的终止液（IX）终止显色反应；

14）使用酶标仪测定450nm波长处的OD值。

3、结果判定

1）PPRV阴性血清（III）的平均OD值即OD_NC；PPRV阳性血清（IV）的平均OD值即OD_PC；酶标抗体平均OD值即OD_Cm；样品的OD值即OD_S；

2）按照以下方法计算阻断率PI

3）根据阻断率判定检验结果,PI_PC>60，PI_NC<40，试验结果有效；否则重新进行试验；PI_S>50，结果为阳性；PI_S≤50，结果为阴性。

【注意事项】

1）需自备的试验用器材：96孔板、100μl、200μl的单道或多道微量移液器，吸头，酶标仪，纯水或去离子水。

2）底物溶液（VIII）避免接触氧化物，出现颜色变化，应弃之不用，应避光保存。

3）终止液（IX）为稀硫酸溶液,避免接触氧化物,若接触到皮肤或眼睛,请及时用大量清水洗涤并就医。

4）需稀释的组分洗涤液20×（V）在稀释时应准确量取，如果发现有结晶应加热使其溶解后使用。

5）在操作过程中,尽量避免将气泡加入检测孔中。

【规格】  （1）96孔/盒 （2）192孔/盒 （3）480孔/盒

【贮藏与有效期】  2~8℃保存，有效期12个月。

【生产企业】

企业名称：青岛立见诊断技术发展中心

企业地址：青岛市城阳区红岛街道岙东南路21号

邮编：266114

电话：0532-87839766

传真：0532-87839766