小反刍兽疫病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒说明书
兽用
【兽药名称】
通用名称:小反刍兽疫病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒
商品名称:无
英文名称:Blocking ELISA Kit for Detecting Antibody of Peste des Petits Ruminants Virus
汉语拼音:Xiaofanchushouyi Bingdu Jingzheng ELISA Kangti Jiance Shijihe
【主要成分与含量】
编号 | 试剂盒组分 | 数量 | 用法 |
1P | 2P | 5P |
PPRV B-I | PPRV B抗原包被板 | 96孔板×1块 | 96孔板×2块 | 96孔板×5块 | 直接使用 |
PPRV B-II | 样品稀释液 | 7ml×1瓶 | 14ml×1瓶 | 35ml×1瓶 | 直接使用 |
PPRV B-III | PPRV阴性血清 | 100μl×1管 | 200μl×1管 | 500μl×1管 | 直接使用 |
PPRV B-IV | PPRV阳性血清 | 100μl×1管 | 200μl×1管 | 500μl×1管 | 直接使用 |
PPRV B-V | 洗涤液20× | 12ml×1瓶 | 24ml×1瓶 | 60ml×1瓶 | 20倍稀释后使用 |
PPRV B-VI | 酶标抗体5× | 1ml×1管 | 1ml×2管 | 5ml×1瓶 | 5倍稀释后使用 |
PPRV B-VII | 吐温-20 | 120μl×1管 | 240μl×1管 | 600μl×1管 | 直接使用 |
PPRV B-VIII | 底物溶液 | 5ml×1瓶 | 10ml×1瓶 | 25ml×1瓶 | 直接使用 |
PPRV B-IX | 终止液 | 5ml×1瓶 | 10ml×1瓶 | 25ml×1瓶 | 直接使用 |
【作用与用途】用于检测绵羊、山羊血清或血浆中小反刍兽疫病毒(PPRV)抗体。
【用法与判定】
1、实验准备:试剂盒各个组分在使用前均须恢复至室温(20~25℃),加液前充分摇匀。
2、操作步骤
PPRV B抗原包被板(I)上PPRV阴性血清(III)、PPRV阳性血清(IV)、样品稀释液(II)和样品的分布如图N、P、Cm和S所示
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 |
A | N | S5 |
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B | N |
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C | P |
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D | P |
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E | S1 |
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F | S2 |
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G | S3 |
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H | S4 |
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1)在A1和B1孔加入PPRV阴性血清(III)各50μl;
2)在C1和D1孔加入PPRV阳性血清(IV)各50μl;
3)在E1和F1孔加入样品稀释液(II)各50μl;
4)剩余孔加入25μl样品稀释液(II),然后加入25μl样品用于检测;
5)轻轻振匀孔中样品(勿溢出),37℃孵育60分钟;
6)将洗涤液20×(V)用纯水或去离子水做20倍稀释,再按0.5‰比例加入吐温-20(VII),即为工作浓度的洗涤液1×;
7)甩干PPRV B抗原包被板孔中的液体,每孔加入300μl洗涤液1×,洗涤4次,在洗涤和加入下一个试剂前,避免孔壁变干;
8)将酶标抗体5×(VI)用样品稀释液(II)做5倍稀释,即为工作浓度的酶标抗体1×;每孔加入50μl的酶标抗体1×;
9)37℃孵育30分钟;
10)甩干PPRV B抗原包被板孔中的液体,每孔加入300μl洗涤液1×,洗涤4次,在洗涤和加入下一个试剂前,避免孔壁变干;
11)每孔加入50μl底物溶液(VIII);
12)室温下避光孵育15分钟;
13)每孔加入50μl的终止液(IX)终止显色反应;
14)使用酶标仪测定450nm波长处的OD值。
3、结果判定
1)PPRV阴性血清(III)的平均OD值即ODNC;PPRV阳性血清(IV)的平均OD值即ODPC;酶标抗体平均OD值即ODCm;样品的OD值即ODS;
2)按照以下方法计算阻断率PI
阳性血清阻断率即PIPC: | PIPC=100- | ODPC | ×100 |
ODCm |
阴性血清阻断率即PINC: | PINC=100- | ODNC | ×100 |
ODCm |
样品阻断率即PIS: | PIS=100- | ODS | ×100 |
ODCm |
3)根据阻断率判定检验结果,PIPC>60,PINC<40,试验结果有效;否则重新进行试验;PIS>50,结果为阳性;PIS≤50,结果为阴性。
【注意事项】
1)需自备的试验用器材:96孔板、100μl、200μl的单道或多道微量移液器,吸头,酶标仪,纯水或去离子水。
2)底物溶液(VIII)避免接触氧化物,出现颜色变化,应弃之不用,应避光保存。
3)终止液(IX)为稀硫酸溶液,避免接触氧化物,若接触到皮肤或眼睛,请及时用大量清水洗涤并就医。
4)需稀释的组分洗涤液20×(V)在稀释时应准确量取,如果发现有结晶应加热使其溶解后使用。
5)在操作过程中,尽量避免将气泡加入检测孔中。
【规格】 (1)96孔/盒 (2)192孔/盒 (3)480孔/盒
【贮藏与有效期】 2~8℃保存,有效期12个月。
【生产企业】
企业名称:青岛立见诊断技术发展中心
企业地址:青岛市城阳区红岛街道岙东南路21号
邮编:266114
电话:0532-87839766
传真:0532-87839766